Banca de DEFESA: JACKSON ALVES DA SILVA QUEIROZ

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : JACKSON ALVES DA SILVA QUEIROZ
DATA : 17/02/2022
HORA: 08:30
LOCAL: Sala Virtual Remota
TÍTULO:

Desenvolvimento de ensaio one step multiplex RT-qPCR quantitativo para monitoramento de carga viral de SARS-CoV-2 em indivíduos infectados com diferentes variantes

PALAVRAS-CHAVES:

SARS-CoV-2; RT-qPCR quantitativo; Persistência viral; Variantes; Mutações.

PÁGINAS: 82
RESUMO:

A COVID-19 tem causado desafios na saúde pública devido ao surgimento de novas variantes, reinfecções e ausência de tratamento. O padrão ouro para o diagnóstico de SARS-CoV-2 é a RT-qPCR qualitativa; entretanto, o papel da quantificação da carga viral ainda não foi completamente investigado. Além disso, os estudos que correlacionam a persistência da SARS-CoV-2 e a evolução da doença permanecem escassos. Desse modo, nosso objetivo foi desenvolver um ensaio RT-qPCR quantitativo para monitoramento de carga viral de SARS-CoV-2 em indivíduos infectados com diferentes variantes. A padronização do ensaio envolveu o método de quantificação absoluta a partir de um plasmídeo recombinante com o gene N de SARS-CoV-2 em matriz biológica para construção de uma curva padrão. O sequenciamento genômico foi realizado utilizando as amostras do estudo com valores de Ct <30 para determinar variantes e mutações de SARS-CoV-2. 244 amostras com diagnóstico qualitativo prévio foram utilizadas para validação do ensaio. Os resultados demonstraram a possibilidade de quantificar até 2,5 cópias/reação e a análise dos 244 pacientes com resultados conhecidos revelaram 100% de concordância com um ensaio qualitativo registrado pela Anvisa. Além disso, realizamos o acompanhamento de carga viral em 47 indivíduos semanalmente. Durante essa avaliação foi detectada carga viral persistente por até 24 dias em 3 indivíduos. A variante Gama foi detectada em 40,4% dos indivíduos, e esse grupo apresentou carga viral inicial maior em comparação com os indivíduos não Gama. Foram selecionados 10 indivíduos internados com quadro grave de COVID-19 e o resultado mostrou a presença da variante Gama em 70% dos casos, e nesta mesma população foi observada uma taxa de óbito de 50%. Com resultado do sequenciamento foi possível detectar as variantes B.1.1.33 (1/20), Gama (13/20), P.1.4 (1/20) e Zeta (3/20), além de 57 mutações encontradas em diferentes genes virais, dentre essas, a mutação ORF9b:Q77E ainda não descrita nos bancos de dados. Conclusão: Os resultados demonstram a aplicação prática de um teste quantitativo de alta sensibilidade para SARS-CoV-2, que pode ser uma útil no acompanhamento de infecções e ressalta a importância da vigilância genômica para identificação e monitoramento de variantes e mutações que podem implicar na mudança do perfil de carga viral de SARS-CoV-2.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 643.265.191-34 - DEUSILENE SOUZA VIEIRA - UNIR
Externo à Instituição - FELIPE GOMES NAVECA - FIOCRUZ
Interno - 739.335.462-49 - SORAYA DOS SANTOS PEREIRA - UNIR