AVALIAÇÃO DA PCR EM TEMPO REAL PARA DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DE Leishmania e Leishmania RNA virus 1 EM AMOSTRAS CLÍNICAS DE PACIENTES COM SUSPEITA DE LEISHMANIOSE TEGUMENTAR.
Leishmaniose, Leishmania RNA virus 1, diagnóstico.
A leishmaniose tegumentar (LT) é uma doença de ampla distribuição geográfica, com
ocorrência em quatro continentes: Américas, Ásia, Europa e África. No Brasil já são
identificadas oito espécies de Leishmania causadoras da LT e todas com ocorrência na
região Norte. L. braziliensis e L. guyanensis são as espécies mais frequentes em casos
de LT e algumas cepas apresentam um endossimbionte viral, o LRV1, que vem sendo
associado a evolução clínica da LT da forma cutânea para a forma mucosa. O
diagnóstico laboratorial é feito por meio do exame parasitológico direto, imunológico e
técnicas moleculares como a PCR e suas variações. Diante das técnicas moleculares que
vem sendo utilizadas no diagnóstico da LT, a qPCR é um método que otimiza o
diagnóstico, pois associa maior sensibilidade e especificidade, com detecção eficiente e
quantitativa. Diante disso, este trabalho teve como objetivo avaliar a utilização de
abordagens de qPCR para quantificação da carga parasitária e viral na rotina de
diagnóstico de LT, de pacientes atendidos no Centro de Medicina Tropical de Rondônia
(CEMETRON), usando amostras de raspado de lesão, sangue e mucosa sadia. Foram
incluídos neste estudo somente pacientes que apresentaram lesão cutânea com suspeita
de LT. Todas as amostras coletadas foram submetidas a extração do material genético,
transcrição reversa (para o RNA de LRV1) seguida da qPCR para detecção e
quantificação de Leishmania com o alvo 18S rDNA e LRV1 com o alvo ORF1. De 100
amostras analisadas para detecção e quantificação de Leishmania, 56 amostras de lesão
cutânea foram positivas utilizando o alvo 18s rDNA. Duas amostras de sangue e 11
amostras de mucosa sadia apresentaram resultado positivo para o mesm. A partir dos
resultados obtidos com a qPCR para o alvo 18S rDNA foram realizados os ensaios para
detecção e quantificação do LRV1. Foram processadas 56 amostras, dessas, 26 amostras
de lesão cutânea, quatro amostras de sangue e 11 amostras de mucosa sadia foram
positivas para LRV1. Os resultados obtidos com a metodologia utilizada apresentaram
um índice de confiança substancial, o que demonstra que o método é robusto e
confiável para ser utilizado na rotina de diagnóstico da LT.