Tripanotiona redutase de Leishmania braziliensis como alvo molecular para prospecção de novos inibidores: Avaliação da Giroxina e Convulxina de Crotalus durissus terrifucus como inibidores
Tripanotiona redutase. Leishmania braziliensis. Toxinas de serpente. Convulxina. Giroxina.
A tripanotiona redutase (TR) é um alvo molecular validado para o desenvolvimento de novos inibidores para o tratamento de doenças causadas por Tripanosomatídeos. Noutra vertente, toxinas de veneno de serpentes, devido à diversidade estrutural e funcional, são fontes importantes de moléculas bioativas para o desenvolvimento de novas drogas, inclusive para o tratamento de doenças como a Leishmaniose. Nesse contexto, o presente trabalho tem como objetivos analisar a interação de toxinas (giroxina e convulxina de Crotalus durissus terrificus) com a tripanotiona redutase de L. braziliensis (TRLb) por modelos in silico e avaliar sua inibição por modelos in vitro. Para isso, foi realizado a docagem molecular entre a TRLb e toxinas utilizando a ferramenta ClusPro2.0. Posteriormente o gene da TRLb foi inserido no vetor pET 28(a+) e expresso em E. coli. A massa molecular relativa e o ponto isoelétrico foram determinados por SDS-PAGE 12,5% monodimensional e bidimensional e a atividade enzimática avaliada utilizando métodos colorimétricos. O veneno de Crotalus durissus terrifucus foi obtido do banco de venenos do LABIOPROTFIOCRUZ-RO. Este foi fracionado por cromatografia de exclusão molecular e as frações liofilizadas e armazenadas à temperatura de - 20 ºC. Como resultados, os ensaios in silico indicaram que a convulxina é capaz de interagir com o sítio do NADPH e a giroxina próximo ao sítio catalítico da enzima, abrindo possibilidades para o desenvolvimento de novas pesquisas na área. Temos que a TRLb foi obtida com alto grau de pureza e com sua atividade catalítica preservada, apontando massa molecular e ponto isoelétrico compatíveis com os descritos na literatura. O fracionamento do veneno de C.d.t resultou em 5 frações enriquecidas com as toxinas de interesse utilizando perfil cromatográfico e massa molecular como parâmetro.