Banca de DEFESA: MATEUS FARIAS DE SOUZA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : MATEUS FARIAS DE SOUZA
DATA : 23/02/2024
HORA: 14:15
LOCAL: Sala Virtual Remora
TÍTULO:

Tripanotiona redutase de Leishmania braziliensis como alvo molecular para prospecção de novos inibidores: Avaliação in vitro e in silico da Giroxina e Convulxina de Crotalus durissus terrificus como inibidores

PALAVRAS-CHAVES:

Tripanotiona redutase. Leishmania braziliensis. Toxinas de serpente. Convulxina. Giroxina.

PÁGINAS: 90
RESUMO:

A tripanotiona redutase (TR) é um alvo molecular validado para o desenvolvimento de novos inibidores para o tratamento de doenças causadas por Tripanosomatídeos. Noutra vertente, toxinas da peçonha de serpentes, devido à diversidade estrutural e funcional, são fontes importantes de moléculas bioativas para o desenvolvimento de novas drogas, inclusive para o tratamento de doenças como a Leishmaniose. Nesse contexto, o presente trabalho tem como objetivos analisar a interação das toxinas (Giroxina e Convulxina de Crotalus durissus terrificus) com a tripanotiona redutase de L. braziliensis (TRLb) por modelos in silico e avaliar sua inibição por modelos in vitro. Para isso, foi realizado a docagem molecular entre a TRLb e toxinas utilizando a ferramenta ClusPro2.0, e dinâmica molecular conduzidas com a ferramenta GROMACS. Posteriormente o gene da TRLb foi inserido no vetor pET 28(a+) e expresso em E. coli. A massa molecular relativa e o ponto isoelétrico foram determinados por SDS-PAGE 12,5% monodimensional e bidimensional e a atividade enzimática avaliada utilizando métodos colorimétricos. O veneno de Crotalus durissus terrificus foi obtido do banco de venenos do LABIOPROT-FIOCRUZ-RO. Este foi fracionado por cromatografia de afinidade em coluna de Tricorn 10/100 preenchida com resina de Benzamidina-Shepharose (GE Healthcare). Nos ensaios de inibição, o IC50 foi calculado utilizando o modelo de regressão não linear no programa GraphPad Prism. Como resultados, os ensaios in silico indicaram que a Convulxina e Giroxina é capaz de interagir com o sítio catalítico da enzima, abrindo possibilidades para o desenvolvimento de novas pesquisas na área. Temos que a TRLb foi obtida com alto grau de pureza e com sua atividade catalítica preservada, apontando massa molecular e ponto isoelétrico compatíveis com os descritos na literatura. A purificação da Giroxina de C.d.t resultou em 3 frações, nominadas de 1, 2 e Giroxina, o perfil eletroforético demonstrou uma única banda proteína com massa molecular de aproximadamente 30 kDa. A Giroxina foi utilizada em diferentes concentrações para a avaliação de sua capacidade inibitória, sendo 5 μM, 1 μM e 0,2 μM, resultando a diminuição da atividade catalítica da TRLb em 88%, 41,2% e 18% respectivamente.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - ALDO RODRIGUES DA SILVA - UFF
Presidente - ***.161.386-** - ANDREIMAR MARTINS SOARES - FIOCRUZ
Externo à Instituição - LUIS ANDRE MORAIS MARIÚBA - FIOCRUZ