Banca de DEFESA: BRUNO GILDO DALLA VECCHIA MORALES

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : BRUNO GILDO DALLA VECCHIA MORALES
DATA : 09/11/2023
HORA: 13:00
LOCAL: Sala Virtual Remora https://bit.ly/Def_Doc_BrunoGildo_PGBIOEXP
TÍTULO:

Padronização de Chiquimato desidrogenase (SDH) de Plasmodium falciparum como alvo para prospecção in silico e in vitro de candidatos a fármacos contra malária

PALAVRAS-CHAVES:

Chiquimato desidrogenase. Expressão proteica. Malária. Plasmodium falciparum. Purificação proteica.

PÁGINAS: 96
RESUMO:

Plasmodium falciparum é conhecido por causar malária grave. O tratamento atual consiste em terapia combinada de artemisinina, mas a resistência pode levar ao fracasso do tratamento. O conhecimento de proteínas essenciais de P. falciparum pode ser utilizado na busca de novos antimaláricos, dentre estas a chiquimato desidrogenase (SDH), parte de uma via responsável pela produção de aminoácidos aromáticos endógenos. A SDH de P. falciparum (PfSDH) é desconhecida da comunidade científica, portanto, este estudo visa estabelecer o primeiro protocolo para expressão de PfSDH ativa. A sequência de nucleotídeos putativa de PfSDH foi usada para construir o vetor de expressão pET28a+PfSDH otimizado para E. coli e inserido na cepa BL21(DE3). As condições ideais de expressão foram obtidas variando o tempo e a concentração de IPTG, mantendo-se fixa a temperatura em 37 °C. A análise por Western Blot foi aplicada para verificar a apropriada presença da PfSDH após expressão. A solubilização e purificação começaram com lise seguida de purificação dupla por IMAC. SDS-PAGE foi aplicado em várias etapas do processo. A atividade enzimática foi avaliada mediante espectrofotometria por meio da oxidação do cofator NADPH. Coeficiente de Tanimoto e similaridade de padrão farmacofóricos foram empregados na busca in silico por ligantes, utilizando o substrato DHS como base. A expressão ideal de PfSDH ocorre com 0,1 mM de IPTG, por 48 horas de crescimento, a 37 °C e agitação de 200 rpm. A PfSDH recombinante obtida após purificação é solúvel, pura e sua catálise fisiológica é confirmada. Dentre os possíveis ligantes levantados, 15 moléculas tiveram maior relevância ao combinar os dois métodos aplicados. Deste modo, este estudo descreve o primeiro protocolo para expressão heteróloga de PfSDH em forma solúvel e ativa, além de instigar maior compreensão acerca das interações ligantes-alvo.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - SPARTACO ASTOLFI FILHO - UFAM
Interno - ***.429.088-** - CAROLINA BIONI GARCIA TELES - FIOCRUZ
Presidente - ***.646.382-** - FERNANDO BERTON ZANCHI - UNIR
Externa à Instituição - JULIANE CORRÊA GLÓRIA - FIOCRUZ
Externo à Instituição - MARCO ALBERTO MEDEIROS