Banca de DEFESA: MAURO VALENTINO PALOSCHI

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : MAURO VALENTINO PALOSCHI
DATA : 29/09/2021
HORA: 09:00
LOCAL: Sala Virtual Remota
TÍTULO:

BIOGÊNESE DE MEDIADORES PRÓ-INFLAMATÓRIOS DE NEUTRÓFILOS HUMANOS ESTIMULADOS PELA L-AMINOÁCIDO OXIDASE DO VENENO DE Calloselasma rhodostoma

PALAVRAS-CHAVES:

Veneno de serpente. Inflamassoma. Fosfolipase A2 citosólica. Ciclooxigenases. Corpúsculos Lipídicos.

PÁGINAS: 149
RESUMO:

Os componentes de venenos de serpentes são moléculas com potencial de bioprospecção nas áreas das Ciências Biológicas e Biomédicas. As proteínas tais como as L-aminoácido oxidases (LAAOs) são responsáveis por efeitos como indução de edema, atividade microbicida, efeitos citotóxicos, coagulantes e anticoagulantes, hemorrágicos e pró-inflamatórios. A LAAO isolada do veneno de Calloselasma rhodosthoma (Cr-LAAO) tem sido demonstrada como um potente estímulo para ativação de neutrófilos e produção de mediadores inflamatórios. No entanto, os mecanismos envolvidos na ativação dessas células induzida pela Cr-LAAO não foram bem caracterizados. Estudos anteriores mostraram que essa enzima é capaz de desencadear a ativação do complexo NADPH oxidase e da proteína de sinalização PKC-α para a produção de espécies reativas do oxigênio (ROS), além de estimular a fagocitose, quimiotaxia com a participação de p38 MAPK e PI3K, liberação de MPO, produção de citocinas (IL-8, IL-6 e TNF-α), armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) e mediadores lipídicos (LTB4 e PGE2). Alguns mediadores lipídicos podem ser inicialmente formados dentro de corpúsculos lipídicos (CLs) por meio da ativação da via das ciclooxigenases (COX). CLs são organelas citoplasmáticas altamente associadas à resposta inflamatória e estão presentes em diversos tipos celulares e podem aumentar em número e/ou tamanho frente a situações infecciosas. Ao mesmo tempo, as ROS podem ativar outros mecanismos inflamatórios como os inflamassomas. Os inflamassomas do tipo NLRP3 são complexos de proteínas citosólicas responsáveis pela clivagem da caspase-1 que leva a ativação proteolítica de citocinas pró-inflamatórias como a IL-1β. Dessa forma, esse estudo tem como objetivo avaliar o efeito da Cr-LAAO sobre a ativação do inflamassoma NLRP3, bem como ativação de via das COX para produção de PGE2 e sua participação da formação de CLs. Utilizando a técnica de microarranjo para avaliar o transcriptoma de neutrófilos, foi observado que a Cr-LAAO desempenha um papel na regulação positiva da expressão de genes que participam do complexo NADPH oxidase e inflamassomas, bem como de genes envolvidos na sinalização e metabolismo de lipídios. Ensaios de imunofluorescência para NLRP3 mostraram o acúmulo dessa proteína e a formação de punctas no citosol, indicando ativação desse complexo. Ainda, testes de expressão proteica na presença e/ou ausência de Apocinina, um inibidor de NADPH oxidase, mostraram que com a inibição de ROS há redução da expressão de proteínas que compõem o inflamassoma NLRP3. Dentre os genes regulados positivamente no microarranjo, encontram-se alguns da família das fosfolipases A2, principalmente fosfolipases A2 citosólica-α (cPLA2-α); e enzimas envolvidas na síntese de PGE2, COX-2 e prostaglandina E sintase (PTGES). Ainda, os genes envolvidos na formação de CLs, perilipinas 2 e 3 (PLIN 2 e 3) e diacilglicerol aciltransferase 1 (DGAT1), também foram regulados positivamente. Pode-se observar que a Cr-LAAO estimulou o aumento da fosforilação de cPLA2-α, a biogênese de CLs e a síntese de PGE2 nos neutrófilos. O tratamento com inibidor de cPLA2-α (CAY10650) ou de DGAT-1 (A922500) suprimiu a formação de CLs e a secreção de PGE2. Em conclusão, esse é o primeiro relato dos efeitos da Cr-LAAO na regulação do metabolismo e na sinalização de lipídeos em neutrófilos humanos, assim como o seu potencial de estimular a ativação do complexo inflamassoma NLRP3 via produção de ROS.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - GUSTAVO BATISTA DE MENEZES - UFMG
Externo à Instituição - HELDER NAKAYA - USP
Externo à Instituição - JOSÉ ROBERTO MINEO - UFU
Presidente - 1726461 - JULIANA PAVAN ZULIANI TRENCH DE SOUZA
Externo à Instituição - PATRICIA TORRES BOZZA - FIOCRUZ