Banca de QUALIFICAÇÃO: SIBELE ANDRADE ROBERTO

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : SIBELE ANDRADE ROBERTO
DATA : 22/04/2022
HORA: 08:30
LOCAL: Sala Virtual Remota
TÍTULO:

Desenvolvimento de anticorpos de camelídeos como insumos imunorreativos aplicáveis para a detecção do vírus HTLV-I

PALAVRAS-CHAVES:

Nanocorpos. HTLV-1. Nanopartículas. Biossensores.Diagnóstico

PÁGINAS: 75
RESUMO:

O Vírus T-linfotrópico humano tipo 1 (HTLV-1) é um dos agentes etiológicos da leucemia/linfoma de células T em adultos e da mielopatia associada ao HTLV-1, denominada paraparesia espástica tropical (HAM/TSP). Cerca de 10-20 milhões de indivíduos estão infectados com o vírus em todo o mundo. A ausência de sintomas e de métodos de rastreamento do HTLV-1 dificultam o diagnóstico e propiciam a transmissão da doença, que ocorre principalmente por contato com fluidos contaminados. No Brasil, os testes aplicados para o diagnóstico da doença são restritos às etapas de triagem nas amostras de doadores de sangue. Dessa forma, a disponibilidade de insumos para auxiliar na detecção da infecção, bem como a sua implantação a nível de saúde pública voltado ao Sistema Único de Saúde (SUS) seria uma alternativa para facilitar o diagnóstico da infecção pelo HTLV-1. Durante a fase aguda da infecção, ocorre a produção de anticorpos anti-p24, o que torna essa proteína e os anticorpos gerados contra ela potenciais marcadores para o diagnóstico. A utilização de moléculas com elevada estabilidade e capacidade de reconhecimento de alvos moleculares de forma específica e sensível, é um critério para a efetividade dos testes de diagnóstico. Nessa perspectiva, os VHHs ou nanocorpos de camelídeos destacam-se por apresentar tais características. Portanto, este trabalho propõe a utilização de VHHs anti-p24 para a construção de biossensores aplicáveis ao desenvolvimento de ensaios para diagnóstico da infecção causada pelo vírus HTLV1. A partir de uma caracterização prévia, foi possível selecionar 3 clones de VHHs (anti-p24/C11, anti-p24/C52 e anti-p24/C86) após sequenciamento. Contudo, apenas os clones VHH-11 e VHH-52 foram efetivamente recombinados em vetor pET-22b(+) e então submetidos a expressão em E.coli cepa BL21(DE3) e SHuffle® T7 Express. Das condições de expressão avaliadas para obtenção do VHH C52 de forma solúvel, a que demonstrou ser mais efetiva foi em E.coli cepa SHuffle® T7 Express com indução a 30ºC e 0,3 mM de IPTG. Após purificação por Cromatografia de Afinidade a Íon Metálico Imobilizado (IMAC), os resultados de Western blot e ELISA confirmaram, respectivamente, a presença do VHH e a permanência de sua reatividade frente à p24. Dada a padronização da síntese das nanopartículas de ouro (AuNPs) pelo método de Turkevich, foi estabelecida as condições de bioconjugação do VHH-52 na concentração de 8 µg e pH 9, às AuNPs, na presença de 75 mM do agente estabilizante ácido acrílico N-hidroxisuccinimida-éster (NHS). Por fim, a imunorreatividade dos biossensores por ensaio do tipo DOT BLOT, demonstrou a capacidade dos bioconjugados em reconhecer diferentes concentrações de p24 do HTLV-1. Os resultados alcançados demonstram a potencialidade do VHH-52, como insumo para constituição de imunossensores. No entanto, ensaios adicionais são necessários para determinação da aplicação dos biossensores baseados em anticorpos do tipo VHH para detecção da p24 do vírus HTLV-1.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - NILSON IVO TONIN ZANCHIN
Externo à Instituição - WALTER RICARDO BRITO - FIOCRUZ-MG
Presidente - 582.482.422-34 - NAJLA BENEVIDES MATOS - UNIR