Leishmania naiffi; Leishmania lindenbergi; diversidade genética.

A leishmaniose é uma doença infecciosa, não contagiosa, causada pelo parasito do gênero Leishmania. A Região Norte possui o maior número de casos de leishmaniose tegumentar (LT) no Brasil, sendo que no estado de Rondônia foram identificadas as sete espécies dermotrópicas circulantes desse parasito no país. Contudo, a identificação de espécies de Leishmania ainda é um desafio para as rotinas laboratoriais. Nesse contexto, o presente trabalho busca avaliar a identificação de Leishmania spp. em amostras sem identificação a nível específico ou identificadas como L. (Viannia) guyanensis, empregando as abordagens de RFLP e análises de sequências nucleotídicas de uma região do gene hsp70. Para isso foram selecionados dois grupos de amostras de pacientes diagnosticados com LT pelo Laboratório de Epidemiologia Genética entre o período de 2012 a 2019, divididos em amostras identificadas por RFLP como L. (V) guyanensis (grupo I) e amostras sem identificação de espécie (grupo II). As amostras foram submetidas a PCR convencional para o alvo hsp70 de 234pb, e em seguida enviadas para plataforma de sequenciamento. Os ensaios de RFLP foram realizados em paralelo utilizando um painel de três enzimas de restrição (HaeIII, BstUI e MboI). Das 110 amostras selecionadas, 66 apresentaram resultado positivo para amplificação do alvo hsp70. Dessas, 30 amostras do grupo I e 36 amostras do grupo II. Ao analisar as sequências obtidas foi possível identificar espécies de 100% das amostras utilizando o algoritmo BLAST. Analisando os resultados obtidos das duas técnicas, no grupo I foram identificadas três espécies, sendo L. (V) braziliensis, L. (V) guyanensis e L. (V) lindenbergi, enquanto no grupo II foram identificadas cinco espécies, sendo elas L. braziliensis, L. guyanensis, L. (Leishmania) amazonensis, L. (V) naiffi e L. (L) infantum. Em três amostras não foi possível a realização da técnica RFLP por falta de material genético e em dez amostras o resultado para RFLP foi inconclusivo. Foi identificado o primeiro caso da espécie L. naiffi causando lesão na mucosa, reforçando a importância dessa espécie na epidemiologia das leishmanioses. A circulação da espécie L. lindenbergi é maior do que se esperava com oito novos registros para o estado de Rondônia. Em regiões de grande biodiversidade como a Amazonia, a diversidade de espécies presente torna a etapa de identificação de espécies essencial para o melhor entendimento da epidemiologia da doença. Embora ainda sejam necessários mais estudos vinculando as espécies de Leishmania a resposta aos tratamentos e manifestações clínicas da doença, é recomendado a identificação de espécies a fim de atualizar dados epidemiológicos. Os resultados obtidos demonstraram que as duas ferramentas moleculares aplicadas nesse estudo (RFLP, análise dos nucleotídeos do alvo molecular) tornaram possível a identificação de espécies de Leishmania registradas no Brasil. Apesar das limitações apresentadas das técnicas, seja em termos de resolução ou de estrutura laboratorial, a técnica de sequenciamento pode ser utilizada de forma complementar para a identificação das espécies de Leishmania quando o resultado pela técnica de RFLP for inconclusivo. Os dados obtidos complementam o banco de registros de espécies de Leishmania em Rondônia, área endêmica de Leishmaniose.