Banca de DEFESA: MARCELA CRISTINA DE SOUZA SILVA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : MARCELA CRISTINA DE SOUZA SILVA
DATA : 15/08/2022
HORA: 13:30
LOCAL: Sala Virtual Remota
TÍTULO:

NANOCORPOS DE CAMELÍDEO CONTRA METALOPROTEINASE P-I DE Bothrops jararacussu: FERRAMENTAS ALTERNATIVAS COADJUVANTES PARA O TRATAMENTO DO ENVENENAMENTO BOTRÓPICO

PALAVRAS-CHAVES:

soroterapia; toxinas botrópicas; BjussuMP-II; nanocorpo.

PÁGINAS: 110
RESUMO:

Impulsionado por muitos avanços na imunologia e biologia sintética, diferentes abordagens e formatos de anticorpos são investigados quanto à capacidade de neutralizar toxinas animais. O Domínio variável da cadeia pesada de anticorpos de camelídeos (VHH) ou nanocorpo, apresenta-se como ferramenta promissora voltada ao diagnóstico e à terapêutica. O VHH apresenta tamanho reduzido (~15 kDa), facilidade de manipulação genética, baixa imunogenicidade, capacidade de penetração em tecidos densos, reconhecimento de epítopos normalmente inacessíveis e estabilidade a alterações de temperatura e pH. Suas características peculiares têm alavancado estudos para a sua aplicação quanto a neutralização de toxinas animais. O elevado número de casos e as sequelas provocadas pelos acidentes ofídicos tornam este agravo um grave problema de saúde pública. Apesar da soroterapia ser efetiva contra os danos sistêmicos, apresentam limitações na neutralização do veneno no local da mordida. Além disso, os soroterápicos podem desenvolver reações de hipersensibilidade devido à sua natureza heteróloga. Assim, a necessidade de preparações mais eficientes, homogêneas e seguras têm instigado a busca por processos e produtos alternativos para o tratamento de envenenamentos por serpentes. Diante disso, esse trabalho propõe a caracterização in silico e in vitro de nanocorpos de Lama glama previamente selecionados contra a metaloproteinase P-I, a BjussuMP-II, do veneno de B. jararacussu. Para isso, os nanocorpos de camelídeos contra BjussuMP-II foram selecionados previamente por meio da tecnologia de Phage Display. Após caracterização gênica por sequenciamento e análise in sílico foram identificados 7 perfis clonais distintos. Para fins de obtenção dos nanocorpos solúveis para os ensaios posteriores, as sequências gênicas dos 7 clones foram recombinadas em vetor pET-22b(+) e expressos em bactérias E.coli cepa BL21(DE3). A imunorreatividade dos clones contra BjussuMP-II foi avaliada por ensaio imunoenzimático, a qual foi mantida após etapa de purificação por coluna cromatográfica de afinidade por cobalto. A especificidade dos nanocorpos também foi determinada por Western blot, com reconhecimento contra a BjussuMP-II e o veneno total de B. jararacussu. Na avaliação da atividade proteolítica da BjussuMP-II sobre a caseína, o VHH OL960543 apresentou potencial inibitório sobre a atividade proteolítica da BjussuMP-II em todas as relações testadas. Por meio de testes in vitro, foi possível observar a redução de 25% dos níveis de LDH liberado pelas células endoteliais murinas (t-END), demonstrando a capacidade do VHH OL960543 em neutralizar parte dos efeitos tóxicos desencadeados pela BjussuMP-II. As análises in silico, por docking molecular, dos VHHs com a BjussuMP-II demonstraram a possível interação com aminoácidos presentes no sítio catalítico, como também em regiões de grande importância para a conformação e estabilidade da toxina de interesse. Os espectros de CD para o VHH OL960543 estimaram uma estrutura secundária de 5,3% α hélice, 44,7% de fita β (3,3% torcida à esquerda; 29,2% relaxada; 12,2% torcida à direita) e 11,2% volta, em concordância com o modelo estrutural teórico gerado para a sequência (4,5% de α hélice, 52,2% de fita β e 16,4% de volta), com temperatura de fusão calculada (TM) de 56,4º C. Os resultados gerados poderão direcionar estudos específicos na perspectiva de produzir ferramentas úteis ao desenvolvimento de imunobiológicos baseados em nanocorpos de camelídeos.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - CARLOS DELFIN CHASVEZ OLORTEGUI - UFMG
Externa à Instituição - ANDREA QUEIROZ MARANHÃO
Externo à Instituição - GILVAN PESSOA FURTADO
Externo à Instituição - MARCOS ROBERTO DE MATTOS FONTES - UNESP
Presidente - ***.335.462-** - SORAYA DOS SANTOS PEREIRA - UNIR