OBTENÇÃO DO ANTÍGENO DELTA RECOMBINANTE COM VISTA AO DIAGNÓSTICO DE INFECÇÕES CAUSADAS PELO VÍRUS DA HEPATITE DELTA
HDV; rHDVAg recombinante; ELISA; Imunodiagnóstico
O vírus da hepatite delta (HDV) é altamente patogênico e está relacionado ao avanço de doenças hepáticas graves como cirrose e câncer. O HDV requer a presença do vírus da hepatite B (HBV) para sua replicação e disseminação. Estima-se que 12 a 72 milhões de pessoas estejam infectadas em todo o mundo com HDV. Apesar dos elevados indicadores endêmicos, as infecções ocasionadas pelo HDV representam uma condição negligenciada pelos serviços de saúde. O diagnóstico do HDV apresenta limitações devido a restrição de insumos aplicáveis a detecção e determinação da infecção viral. Objetivando a produção de metodologias relevantes para fins de detecção da infecção pelo HDV, foram desenvolvidos alvos antigênicos recombinantes provenientes de sequências do antígeno delta (HDVAg) dos genótipos I e III do HDV. Foi realizada a caracterização do HDVAg recombinante (rHDVAg) e diferentes variáveis foram analisadas com vista a avaliação da aplicação deste alvo para a detecção da infecção por HDV. Para isso, foram conduzidos ensaios sorológicos visando detectar a presença de anticorpos anti-HDVAg, empregando ELISA e um painel contendo 170 amostras sorológicas. Destas, 66 soros foram previamente caracterizados por qRT-PCR, dos quais 46 foram identificados como soropositivos para o HDV e 20 como soronegativos. Da mesma forma, para investigar possíveis reações cruzadas, foram utilizadas 104 amostras previamente caracterizadas em relação aos diferentes agentes infecciosos virais. Os resultados preliminares dos ensaios sorológicos utilizando rHDVAg-I e rHDVAg-III revelaram uma sensibilidade de 53,66% e especificidade de 90,0%, e uma sensibilidade de 95,7% e especificidade de 90,0%, respectivamente. Foi possível demonstrar a efetividade do rHDVAg-III quanto a capacidade de reconhecer de forma específica as infecções causadas pelo HDV. Os dados parciais alcançados nos ensaios enzimáticos, demonstram que o produto elaborado neste estudo tem potencial para o diagnóstico do HDV. A prova de conceito de fase I demonstrou a capacidade da aplicação do rHDVAg, para fins de elaboração de protótipos diagnósticos, podendo compor ensaios do tipo imunoenzimático, quimioluminescente e constituir dispositivo de teste rápido para detecção da infecção viral. Perspectivamente, será necessário ampliar o número de amostras testadas tanto de áreas endêmicas quanto não endêmicas para concluir a análise de forma abrangente e avançar para a fase II do estudo. É importante destacar que a elaboração de diferentes estratégias diagnósticas com insumos de elevada sensibilidade e especificidade para a detecção e/ou triagem do alvo antigênico rHDVAg poderá auxiliar no prognóstico e, com atenção a prevenção da evolução da infecção e redução dos custos gerais relacionados as complicações devido a cronicidade, e ainda permitirá a atenção ao paciente de modo a restringir o agravamento hepático ocasionados pelo vírus HDV.