Banca de QUALIFICAÇÃO: PRICILA GOMES DA SILVA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : PRICILA GOMES DA SILVA
DATA : 23/05/2024
HORA: 14:30
LOCAL: Sala Virtual Remota
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ENZIMÁTICA DE UM COMPLEXO ENTRE A CATEPSINA D BOVINA E A BthTX-II DO VENENO DE Bothrops jararacuçu

PALAVRAS-CHAVES:

Catepsina D, Venenos de Serpentes, Fosfolipases A2, Complexo
Enzimático.

PÁGINAS: 48
RESUMO:

As PLA2 e a Catepsina D são enximas importantes em diversas doenças humanas,
incluindo distúrbios neurodegenerativos e câncer. Proteases aspárticas
semelhantes á catepsina D também são essenciais para o ciclo de vida de diversos
parasitas e podem mediar processos patológicos em diversos ambientes celulares.
Recentemente, Moraes e colaboradores (2022) evidenciaram que a CatD humana
e uma fosfolipase A2 do veneno de B. jararacussu são capazes de se ligarem e
formar um complexo estável e funcional. O objetivo do presente trabalho foi
identificar e caracterizar a atividade enzimática do complexo Catepsina D bovina e
a BthTX-II frente a diferentes substratos e condições fisico-quimicas. A metodologia
utilizada para obtenção da Catepsina D consistiu em triturar 500g de Fígado bovino
com 20% de acetona em um liquidificador por aproximadamente 3 minutos. Em
seguida, foi a amostra foi aplicada em cromatografia em coluna de afinidade
imobilizada com Sepharose + Pepstantina A previamente equilibrada com Acetato
de sódio 0,1M pH 5,0 e eluída em gradiente step de 0 e 100% de Acetato de sódio pH
5,0 + NaCl 0,5M (tampão B) e tampão C contendo Tris-HCL (pH 8,5) 0,1M sob fluxo de
1mL/min, durante 40 minutos. Posteriormente, a amostra de interesse foi submetida a

uma segunda etapa cromatográfica, em coluna de fase reversa C18 (25 cm x 0,45, cm-
Discovery) previamente equilibrada com ácido trifluoracético 0,1% E ELUÍDA SOB

gradiente de 0 a 70% de solução B [ACN 99,9% (v/v) e TFA 0,1% (v/v)] sob fluxo de
1mL/min. A avaliação da massa relativa, grau de pureza e ponto isoelétrico foi
observado em SDS-PAGE 12,5% e eletroforese bidimensional, além da determinação
do pH e temperatura ideias de atividade da enzima sobre o substrato caseína, com
leitura em espectofotômetro a 660nm. A atividade da BthTX-II foi avaliada sobre os
substratos caseína e 4N3OBA. A proteína isolada apartir de fígado bovino apresentou
massa molecular relativa de aproximadamente 32 kDa, pI de 5,5 e atividade ideal sobre
substrato caseína em pH 3 e temperatura 50oC, semelhante aos dados observados na
literatura para CatD de outros organismos. Além disso, a BthTX-II apresentou atividade
significativa sobre o substrato sintético especifico 4N3OBA e ausência de atividade
sobre caseína, conforme esperado. Quando complexadas, essas enzimas
apresentaram diferenças no perfil de atividade conforme evidenciado sobre o substrato
caseína. Em suma, os resultados obtidos até o momento confirmam a efetividade do

novo protocolo desenvolvido para a obtenção, purificação e caracterização fisico-
quimica de uma Catepsina D apartir de figado bovino e avaliam pela primeira vez o perfil

de atividade enzimática do complexo CatD bovina + BthTX-II. Esses resultados forncem
uma base sólida para futuras pesquisas e aplicações no campo de biotecnologia e
saúde.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - ***.161.386-** - ANDREIMAR MARTINS SOARES - FIOCRUZ
Externo à Instituição - LUIS ANDRE MORAIS MARIÚBA - FIOCRUZ
Externa à Instituição - NIDIANE DANTAS REIS PRADO - São Lucas